Цитотоксический тест

Цитотоксический тест известен также под названием лейкоцитотоксичес-кий тест или тест Брайенов [2, 3]. Его выполняют следующим образом: каплю цельной крови или лейкоцитарной взвеси помещают на предметное стекло, покрытое экстрактом из пищевого продукта, и проводят микроскопическое исследование нативного (неокрашенного) препарата. Иногда к клеткам крови добавляют каплю воды. Лаборант просматривает неокрашенные клетки и отмечает изменения формы и вида лейкоцитов. Основу положительного результата теста, который считается доказательством наличия аллергии на пищевой продукт, составляют субъективные впечатления о набухании, вакуолизации, приобретении клетками зазубренных очертаний и других изменениях морфологических признаков лейкоцитов. Поскольку эта процедура не стандартизована по времени инкубирования, значениям рН применяемых растворов, величине осмотического давления, температуре проведения, а также другим условиям постановки теста, точное определение морфологически изменённых лейкоцитов практически невозможно. Тем не менее этот метод рекламируют в качестве теста для выявления аллергии на пищевые продукты или ЛС. Аллергические заболевания, причиной которых являлась бы индуцированная пищевыми аллергенами лейкоцитарная цитотоксичность, неизвестны. Несмотря на то что некоторые ЛС провоцируют иммунологически опосредованную цитотоксичность в отношении лейкоцитов, ни в одном из исследований этот феномен для теста Брайенов не подтверждён. В нескольких контролируемых клинических испытаниях показано, что тест цитотоксичности не воспроизводится и не коррелирует с каким-либо клиническим доказательством наличия пищевой аллергии [4, 5]. В России этот тест применяют под названиями реакция лейкоци-толиза (лизиса лейкоцитов) при диагностике лекарственной аллергии, а также показатель повреждения нейтрофилов для выявления бактериальной сенсибилизации; достоверность и специфичность названных тестов аналогичны ци-тотоксическому тесту.

Провокация-нейтрализация

Тест предлагается использовать для диагностики аллергии на пищевые продукты, ингаляционные аллергены и химические вещества, а также гормоны и микроорганизмы, в частности Candida albicans. Исследование заключается во введении больному тестовой дозы исследуемого вещества в виде экстракта внутрикожно, подкожно, либо каплю раствора помещают под язык. Затем регистрируют любые субъективные ощущения, возникающие в течение следующих за введением 10 мин. Любые жалобы больного рассматривают как положительный результат теста, расцениваемый как доказательство аллергии на данное вещество. При отрицательном результате теста его повторяют с более высокой концентрацией вещества до тех пор, пока больной не сообщит о появлении каких-либо симптомов. После этого больному дают более низкие концентрации экстракта; если симптомы не возникают или ослабляются, говорят о нейтрализации [6-13]. В последующем нейтрализующую дозу используют как лечебную процедуру. При проведении теста путём внутрикожных инъекций возрастающий диаметр волдыря при введении увеличивающихся доз экстракта вещества рассматривают как подтверждение положительного результата теста. Жалобы больного на появление любых ощущений при выполнении теста провокации-нейтрализации расценивают как положительный результат даже в том случае, если это не соответствует анамнестическим данным [14, 15]. Некоторые авторы рекомендуют во время проведения указанного теста измерять частоту и наполнение пульса, хотя в отношении значимости этого критерия имеются разногласия. Наиболее часто для тестирования указанным методом используют экстракты пищевых продуктов, химические вещества (например, фенол, формальдегид, этанол), экстракты ингаляционных аллергенов, гормоны, медиаторы воспаления (в том числе гистамин и серотонин) и даже физиологический раствор или воду. Сообщения, касающиеся тестирования с применением метода провокации-нейтрализации, содержат противоречивые результаты [16]. В них фигурируют больные с различными клиническими проявлениями, разными методами тестирования и различными критериями положительного результата. Во многих исследованиях нет контроля с плацебо. Таким образом, эти исследования характеризует отсутствие стандартизованного подхода и субъективная оценка учёта результатов. Современные концепции не могут дать разумного объяснения предполагаемому провоцированию симптомов и их немедленной нейтрализации в условиях указанной процедуры [17]. При проведении ДСПТИП у больных с пищевой аллергией было показано, что субъективные признаки провоцировались с одинаковой частотой при использовании как экстрактов пищевых продуктов, так и плацебо [18, 19]. Более того, у больных с выраженной IgE-опосредованной гиперчувствительностью к аллергену такая процедура потенциально опасна в плане возникновения отёка слизистой оболочки полости рта и даже системной реакции [20]. При тестировании с ингаляционным воздействием химических веществ в кабинах для тестирования приводятся даже их концентрации [21]. Однако, в отличие от провокационного тестирования при БрА, положительный результат теста базируется только на субъективных ощущениях больного. Сообщения о контролируемых исследованиях, проведённых с использованием этого метода, отсутствуют. Электродермальная диагностика сводится к измерению электрического сопротивления кожи до и после воздействия аллергена [22]. Аллергенный экстракт (обычно приготовленный из пищевого продукта) помещают в контейнер, устанавливаемый на включённую в электрическую цепь металлическую чашку, соединяющую больного и гальванометр. При изменении электрического сопротивления кожи говорят о положительном результате теста, указывающем на аллергию на пищевой продукт. Эта процедура не имеет рациональной физиологической основы, а специальные исследования, подтверждающие достоверность теста, не проводились. Сторонники этой странной процедуры используют для её проведения кожные точки при акупунктуре. Прикладная кинезиология. Метод прикладной кинезиологии представляет собой измерение мышечной силы конечности до и после воздействия на пациента того или иного аллергена [23]. Флакончик с аллергенным экстрактом (обычно пищевой продукт) прикладывают к коже больного; лаборант проводит измерение и оценку мышечной силы, опираясь на субъективные ощущения. Утрату или ослабление мышечной силы считают положительным результатом, указывающим на наличие аллергии на использованный для проведения теста пищевой продукт. Разумного объяснения идеи об ослаблении скелетной мускулатуры при гиперчувствительности к пищевым или любым другим аллергенам нет, а предположение о том, что воздействие аллергена может осуществляться через флакончик при контакте с кожей, совершенно не выдерживает критики. Диагностические процедуры, некорректно используемые при диагностике аллергии Включённые в эту категорию процедуры неэффективны при диагностике аллергии, хотя могут использоваться при других заболеваниях. Их можно подразделить на две группы: неиммунологические пробы и иммунологические тесты.